PML-RARA, Hibridação in situ, sangue periférico

Orientações aos clientes

• Este exame é realizado em sangue periférico e pode ser coletado de segunda a domingo, inclusive feriados, durante o horário de atendimento normal do Laboratório.

Orientações necessárias

• Este exame é realizado em sangue periférico e pode ser coletado de segunda a domingo, inclusive feriados, durante o horário de atendimento normal do Fleury.

Processamento e adequação da amostra

• Receber a amostra em embalagem REF e mantê-la nesta condição até a manipulação.
• Encaminhar a amostra sob refrigeração, o mais rápido possível, à seção, com a folha de trabalho, etiquetas com código de barras, questionário preenchido e cópia da receita médica.

Estabilidade da amostra:

Temperatura ambiente: não aceitável;

Refrigerada (2-8 ºC): 24 horas;

Congelada (-20 ºC): não aceitável.

Método

• Hibridação "in situ" por fluorescência. Trata-se de uma reação onde se usa sonda (DNA) marcada com fluorocromo que vai se ligar ao DNA alvo complementar.
• São contadas, no mínimo, 200 intérfases por pelo menos dois observadores.

Valor de referência

Controle normal < 4% de células com duas fusões de PML/RARA e um sinal extra separado de PML e RARA.

Interpretação e comentários

• A hibridação in situ por fluorescência (FISH) é particularmente útil na investigação de leucemias promielocíticas agudas (LPA ou LMA-M3) porque detecta a fusão do gene PML com o gene do receptor do ácido retinóico (RARA), a qual forma o gene quimérico PML-RARA. Esse rearranjo gênico ocorre em aproximadamente 90% dos casos e é o equivalente molecular da translocação entre os cromossomos 15 e 17. O exame é rápido, sensível e específico, podendo ser feito tanto em metáfase quanto em interfase.