HIV-1, Resistência a Medicamentos Antiretrovirais, plasma

Orientações aos clientes

• Não é necessário preparo para este exame.
• Esse teste é validado para amostras com carga viral igual ou superior a 500 cp/mL. Amostras com cargas virais inferiores a 500 cp/mL podem ser avaliadas, porém o resultado pode ser inconclusivo por falha de detecção do HIV-1 ou de mutações eventualmente presentes.
• Não é possível realizar o exame em pessoas sem carga viral detectada (resultado negativo ou indetectado).

Processamento e adequação da amostra

Receber a amostra em embalagem REF e mantê-la nesta condição até a manipulação.

Dentro de, no máximo, 4 horas após a coleta, centrifugar o material por 10 minutos a 2200 g, a 18 °C;

Aliquotar o plasma em tubo plástico estéril;

Enviar à seção congelado.

Estabilidade da amostra:

Temperatura ambiente: não aceitável;

Refrigerada (2-8 ºC): 4 horas;

Congelada (-20 ºC): 1 mês.

ATENÇÃO: NÃO RECEBER amostras intensamente hemolisadas, lipêmicas ou hiperbilirrubinêmicas.

Método

Sequenciamento das regiões codificantes da protease (codons1-99), transcriptase reversa (codons 1-320) e integrase (codons1-288) do HIV-1. Este exame é realizado pelo método de sequenciamento de próxima geração (NGS), cujos resultados são reportados de acordo com parâmetros de qualidade definidos durante a validação. Com cobertura das regiões alvo de pelo menos 500x, o teste foi capaz de identificar o padrão de resistência do HIV-1 em 100% das amostras com resultado prévio de RT-PCR em tempo real maior ou igual a 1000 cópias/mL e em 95% das amostras com resultado maior ou igual a 500 cópias/mL.

Valor de referência

Ausência de mutações de resistência.

Interpretação e comentários

O teste é indicado para a avaliação do perfil de resistência/sensibilidade do HIV-1 aos medicamentos antirretrovirais. O exame é realizado por meio do sequenciamento de próxima geração dos genes da protease, transcriptase reversa e integrase do HIV-1 e da identificação de mutações que, quando presentes, podem determinar resistência aos inibidores dessas enzimas virais, utilizados no tratamento da infecção. A análise da combinação de mutações, que permite inferir o perfil genotípico de resistência aos medicamentos, utiliza o algoritmo de um banco de dados público curado (Stanford University HIV Drug Resistance Database), atualizado regularmente e reconhecido internacionalmente como ferramenta de escolha para este fim.

O exame permite analisar adequadamente os subtipos B e não-B do HIV-1.

Na prática, o teste detecta mutações que conferem resistência aos antirretrovirais descritos abaixo:

1) Inibidores da protease:

Atazanavir/r (ATV/r)

Darunavir/r (DRV/r)

Lopinavir/r (LPV/r)

2) Inibidores da transcriptase reversa análogos de nucleosídeos

Abacavir (ABC)

Zidovudina (AZT)

Emtricitabina (FTC)

Lamivudina (3TC)

Tenofovir (TDF)

3) Inibidores da transcriptase reversa não-análogos de nucleosídeos:

Doravirina (DOR)

Efavirenz (EFV)

Etravirina (ETR)

Nevirapina (NVP)

Rilpivirina (RPV)

4) Inibidores de Integrase

Bictegravir (BIC)

Cabotegravir (CAB)

Dolutegravir (DTG)

Elvitegravir (EVG)

Raltegravir (RAL)

O perfil de resistência genotípica não necessariamente reflete o fenótipo do vírus quando exposto às drogas, e sua interpretação deve considerar o histórico de esquemas de tratamento utilizados pelo paciente.

Orientações necessárias

• Não é necessário preparo para este exame.
• Esse teste é validado para amostras com carga viral igual ou superior a 500 cp/mL. Amostras com cargas virais inferiores a 500 cp/mL podem ser avaliadas, porém o resultado pode ser inconclusivo por falha de detecção do HIV-1 ou de mutações eventualmente presentes.
• Não é possível realizar o exame em pessoas sem carga viral detectada (resultado negativo ou indetectado).