Gene BRAF, Detecção da mutação V600E, fragmento de tecido

Orientações aos clientes

I Informações sobre o exame:

Este exame consiste na análise das mutações somáticas V600E/K/R/D no gene BRAF, por meio do sequenciamento de nova geração. O exame pode ser realizado em material obtido a partir de tecidos (lâminas, esfregaços, material fresco ou blocos de parafina), sendo útil nos casos de carcinoma papilífero de tiroide, melanoma metastático e adenocarcinoma colorretal.

II Critérios de realização:

Para a realização deste exame é necessária solicitação médica.

É imprescindível que seja fornecida cópia do laudo original da análise do material.

Caso sejam enviadas somente lâminas para a análise, são necessárias pelo menos duas lâminas, que podem estar coradas com Hematoxilina e Eosina (H&E) ou pelos métodos Panótico ou Papanicolau.

Poderão ser aceitos os seguintes materiais:

Fragmentos de tecido fixados em formalina 10%, preferencialmente tamponada, embebidos ou não em parafina (enviar em temperatura ambiente);

Lâminas de corte histológico (enviar em temperatura ambiente) (10 lâminas; seção de 5µm de espessura e 1 lâmina corada pela hematoxilinaeosina (HE);

Esfregaços com ou sem lamínula (enviar em temperatura ambiente);

Material fresco congelado ou enviado em meio de conservação para ácidos nucléicos em temperatura ambiente.

ATENÇÃO: Não será aceito lâmina com resina ao invés de lamínula ou material fora das condições citadas acima.

O material em bloco de parafina deve ser fixado previamente em formalina o mais rápido possível após a biópsia ou cirurgia. O material enviado em formol deve ter sua fixação de no mínimo seis horas e, no máximo, 48 horas. A adoção desse cuidado e a coleta de amostras suficientemente volumosas do tumor garantem o sucesso do teste.

É importante salientar que o material enviado sempre será analisado por um médico patologista antes da análise do exame. Dessa forma, se o material enviado for insuficiente ou inadequado para o teste, o mesmo não poderá ser realizado. É necessário que o tecido tenha células tumorais presentes e em quantidade superior a 20%.

Orientações necessárias

I Informações sobre o exame:

Este exame consiste na análise das mutações somáticas V600E/K/R/D no gene BRAF, por meio do sequenciamento de nova geração. O exame pode ser realizado em material obtido a partir de tecidos (lâminas, esfregaços, material fresco ou blocos de parafina), sendo útil nos casos de carcinoma papilífero de tiroide, melanoma metastático e adenocarcinoma colorretal.

II Critérios de realização:

Para a realização deste exame é necessária solicitação médica.

É imprescindível que seja fornecida cópia do laudo original da análise do material.

Caso sejam enviadas somente lâminas para a análise, são necessárias pelo menos duas lâminas, que podem estar coradas com Hematoxilina e Eosina (H&E) ou pelos métodos Panótico ou Papanicolau.

Poderão ser aceitos os seguintes materiais:

Fragmentos de tecido fixados em formalina 10%, preferencialmente tamponada, embebidos ou não em parafina (enviar em temperatura ambiente);

Lâminas de corte histológico (enviar em temperatura ambiente) (10 lâminas; seção de 5µm de espessura e 1 lâmina corada pela hematoxilinaeosina (HE);

Esfregaços com ou sem lamínula (enviar em temperatura ambiente);

Material fresco congelado ou enviado em meio de conservação para ácidos nucléicos em temperatura ambiente.

ATENÇÃO: Não será aceito lâmina com resina ao invés de lamínula ou material fora das condições citadas acima.

O material em bloco de parafina deve ser fixado previamente em formalina o mais rápido possível após a biópsia ou cirurgia. O material enviado em formol deve ter sua fixação de no mínimo seis horas e, no máximo, 48 horas. A adoção desse cuidado e a coleta de amostras suficientemente volumosas do tumor garantem o sucesso do teste.

É importante salientar que o material enviado sempre será analisado por um médico patologista antes da análise do exame. Dessa forma, se o material enviado for insuficiente ou inadequado para o teste, o mesmo não poderá ser realizado. É necessário que o tecido tenha células tumorais presentes e em quantidade superior a 20%.

Processamento e adequação da amostra

Enviar o material (lâminas, esfregaços, material fresco ou blocos de parafina) à Seção de Anatomia patogênica junto com cópia do laudo original (quando o material não tiver sido analisado no Fleury) em temperatura ambiente.

Método

Sequenciamento de nova geração para avaliação de mutações pontuais do códon 600 no gene BRAF, de forma a investigar as variantes V600E/K/R/D, com frequência alélica mínima de 5%.

Valor de referência

Mutação não detectada.

Interpretação e comentários

A mutação V600E está presente em aproximadamente 40% dos carcinomas papilíferos de tiroide e está associada a um tumor de comportamento mais agressivo, ou seja, presença de multifocalidade, extensão extra tiroidiana e metástase linfonodal. Referências: Elisei R, et al 2008. J Clin Endocrinol Metab 93 (10):39439 e Xing M. 2007. Endocrine Reviews 28: 74262.

A avaliação da mutação V600E no gene BRAF nos adenocarcinomas colorretais é indicada na tentativa de estratificar o risco de um indivíduo ser portador de uma síndrome hereditária ou identificar o indivíduo que poderá se beneficiar de um teste genético subseqüente.

A presença de mutação no gene BRAF no tumor colorretal com perda de MLH1 e/ou Instabilidade de Microssatélites sugere fortemente tratarse de uma neoplasia de origem esporádica (ou seja, devido à alteração somática) e não uma neoplasia decorrente da mutação germinativa de gene de reparo do DNA (Síndrome de Lynch). No entanto, na ausência da mutação de BRAF, nestes tumores, a probabilidade de uma mutação germinativa no gene MLH1 é considerada muito alta. Referências: Kadiyska TK, et al 2007. Cancer Detect Prev 31(3):2546.Loughrey MB, et al 2007. Fam Cancer 6(3):30110.

MELANOMA

Este exame deve ser realizado em amostra de tecido que contenha no mínimo 5% de células tumorais; a habilidade de detectar as mutações fica comprometida quando existe uma quantidade menor de células neoplásicas.