ESTUDO MOLECULAR DO GENE, sangue total

Orientações aos clientes

IMPORTANTE:

• Este exame é realizado somente com pedido médico e mediante a assinatura de termo de consentimento pelo cliente ou por seus responsáveis, em caso de menores de idade.
• O questionário poderá ser respondido no dia da coleta do exame.
• Esse exame inclui a coleta de amostras dos pais para a melhor interpretação do resultado, na impossibilidade da coleta dos pais, contatar o laboratório.
• Clientes menores de 18 anos deverão vir acompanhados de um adulto responsável.

Orientações necessárias

IMPORTANTE:

• Este exame é realizado somente com pedido médico e mediante a assinatura de termo de consentimento pelo cliente ou por seus responsáveis, em caso de menores de idade.
• O questionário poderá ser respondido no dia da coleta do exame. Se houver dificuldade para preenchimento do questionário, o médico da unidade de coleta poderá ajudar. Se o cliente preferir, a equipe de assessores de endocrinologia poderá entrar em contato para ajuda com o preenchimento do questionário.
• Esse exame inclui a coleta de amostras dos pais para a melhor interpretação do resultado, na impossibilidade da coleta dos pais, contatar o laboratório.
• Clientes menores de 18 anos deverão vir acompanhados de um adulto responsável.

Processamento e adequação da amostra

• Não manipular.
• Enviar o material para LARI-LARN em temperatura refrigerada, junto com o Questionário e Termo de Consentimento preenchidos e assinados.

Estabilidade da amostra:

Temperatura ambiente: Não aceitável;

Refrigerada (2-8 ºC): 5 dias;

Congelada (-20 ºC): Não aceitável.

Método

Inicia-se pela pesquisa das 14 mutações no gene CYP21A2 mais frequentes.

É realizada uma amplificação com primers específicos para o gene ativo CYP21A2, totalizando duas reações de PCR: uma amplifica os exons 1 ao 3 e a outra os exons 3 ao 10. Estes produtos de PCR serão utilizados como molde na reação de sequencimento de todo o gene, incluindo exons, introns e região promotora proximal.

Para a pesquisa de grandes rearranjos gênicos envolvendo o gene CYP21A2, tais como deleção e grande conversão gênica e também para a pesquisa da mutação Del 8 nt utiliza-se a técinica de MLPA (Multiplex ligation-dependent probe amplification).

Valor de referência

• O resultado será acompanhado de um relatório interpretativo.

Interpretação e comentários

• Este estudo está indicado para o diagnóstico pós-natal de portadores das formas clássica e não clássica da deficiência da 21-hidroxilase e para parceiro de portadora das diferentes formas clínicas dessa deficiência, para aconselhamento genético. O estudo de um determinado indivíduo se inicia pelas mutações mais frequentes na forma clínica da doença apresentada. A seguir, as mutações identificadas no caso-índice são pesquisadas no DNA dos pais. Para os casos em que se deseja pesquisar uma mutação conhecida nos outros parentes do caso-índice, o Fleury disponibiliza um teste confirmatório com esta finalidade. Em 94% dos alelos, identificamos, em nossa casuística, apenas uma mutação de ponto por alelo. A associação da técnica de sequenciamento permite o diagnóstico de 100% dos alelos da forma clássica e de 81% dos alelos da forma não clássica. Os estudos moleculares do gene da 21- hidroxilase demonstram a possibilidade de falha de amplificação do alelo normal ou mutante particularmente no sítio da mutação I2 Splice, o que ocorre em aproximadamente 8% dos alelos. Esses problemas podem ser minimizados com a associação do estudo de microssatélites que flanqueiam o gene CYP21A2, o qual é realizado quando há necessidade.