Dihidro-Rodamina, Oxidação, teste, sangue total

Orientações aos clientes

I - Informação sobre o exame:

• Este exame requer agendamento prévio, sendo assim, o interessando deve contatar a Central de Atendimento ao Cliente, pois o exame possui restrição de dias e horários para a coleta e para a entrega de material colhido.
• Para a realização do exame, é necessário que no dia e horário agendado, o cliente compareça à unidade de atendimento ACOMPANHADO de algum outro indivíduo sadio para a coleta do exame "controle", PREFERENCIALMENTE (mas não exclusivamente) não aparentado.

A coleta do exame "controle" necessita ser realizada para servir como referência para o resultado do paciente em estudo, tendo em vista que não há valores de normalidade padronizados para o teste. Além disso, garante a confiabilidade do envio e coleta da amostra, pois como o teste é funcional e necessita que as células estejam vivas no momento da análise, a presença de alterações inesperadas em uma pessoa sem a doença (controle) invalida o teste inteiro.

II - Critérios de realização:

• Não há necessidade de preparo para este exame.
• A coleta das amostras do paciente e do indivíduo sadio (controle) deve ser realizada no mesmo momento, não sendo possível realizar em dias e horários diferentes.

Orientações necessárias

I - Informação sobre o exame:

• Este exame requer agendamento prévio, sendo assim, o interessando deve contatar a Central de Atendimento ao Cliente, pois o exame possui restrição de dias e horários para a coleta e para a entrega de material colhido.
• Para a realização do exame, é necessário que no dia e horário agendado, o cliente compareça à unidade de atendimento ACOMPANHADO de algum outro indivíduo sadio para a coleta do exame "controle", PREFERENCIALMENTE (mas não exclusivamente) não aparentado.

A coleta do exame "controle" necessita ser realizada para servir como referência para o resultado do paciente em estudo, tendo em vista que não há valores de normalidade padronizados para o teste. Além disso, garante a confiabilidade do envio e coleta da amostra, pois como o teste é funcional e necessita que as células estejam vivas no momento da análise, a presença de alterações inesperadas em uma pessoa sem a doença (controle) invalida o teste inteiro.

II - Critérios de realização:

• Não há necessidade de preparo para este exame.
• A coleta das amostras do paciente e do indivíduo sadio (controle) deve ser realizada no mesmo momento, não sendo possível realizar em dias e horários diferentes.

Processamento e adequação da amostra

AMOSTRA

• Sangue, em heparina sódica (tampa verde).
• Não manipular amostras.
• Receber dois tubos de heparina sódica de 4,0 mL de sangue total sendo 1 tubo do paciente a ser estudado e outro tubo do indivíduo sadio (controle).
• Os tubos virão identificados como PACIENTE e CONTROLE
• Encaminhar as amostras refrigeradas ao setor técnico.
• A coleta deve acontecer somente nos dias úteis.
• A amostra deve chegar no setor técnico no mesmo dia da coleta até 17 horas.

Obs.: Após o horário de recebimento, consultar o setor para verificar a possibilidade de realização do exame.

ESTABILIDADE DA AMOSTRA

12 hs, Refrigerada (4-8ºC).

Método

• Estudo da capacidade de oxidação dos neutrófilos com e sem estímulo pelo PMA (phorbol myristate acetate) na presença de catalase e dihidrorodamina 123 (DHR), por citometria de fluxo.

Valor de referência

• Índice de Oxidação Neutrofílica (relação entre a fluorescência média emitida com e sem estimulação pelo PMA): > 80.

Interpretação e comentários

´- O teste de oxidação da diidrorrodamina-123 (DHR-123) tem sido utilizado para o diagnóstico de portadores do gene da doença granulomatosa crônica (DGC).

• Este exame substitui, com vantagens, o clássico teste do nitrobluetetrazolium (NBT). Os indivíduos com DGC apresentam um defeito no complexo enzimático NADPH oxidase, sendo incapazes de produzir superóxido e outras espécies de oxigênio reativo após estimulação dos neutrófilos. A DHR-123 é oxidada em rodamina-123 pelo H2O2 e O2 produzidos durante a ativação neutrofílica, com emissão de fluorescência mensurável por citometria de fluxo.
• O resultado é obtido por meio da análise comparativa entre os histogramas das células estimuladas ou não com PMA e sua respectiva fluorescência média. O teste é considerado validado SOMENTE se uma amostra de controle sadio coletada simultaneamente e submetida às mesmas condições de transporte e processamento apresentar Índice de Oxidação Neutrofílica (ION) >80 concomitantemente. Por essa razão, é IMPERATIVA a coleta de amostra de algum outro indivíduo sadio (controle), PREFERENCIALMENTE (mas não exclusivamente) não aparentado. A ausência da coleta da amostra controle inviabiliza a realização do teste.
• Os neutrófilos normais evidenciam índice de oxidacão neutrofílica (ION) maior que 80. Os indivíduos com DGC ligada ao cromossomo X apresentam ION menor que 10. Já as mulheres portadoras do gene da DGC ligada ao cromossomo X têm duas populações de neutrófilos, uma com ION normal e outra com ION menor que 10. Por fim, os portadores de DGC autossômica recessiva apresentam valores de ION de 3,5 a 52, havendo, portanto, informação sugestiva do genótipo da doença.