Bordetella pertussis e parapertussis, Detecção do DNA por PCR, Vários Materiais

Orientações aos clientes

• O exame pode ser realizado em secreção de nasofaringe.
• É possível fazer o teste também em secreção traqueal, lavado brônquico ou broncoalveolar.
• O jejum de duas horas é necessário para evitar a ocorrência de vômito durante a coleta da amostra.

Orientações necessárias

• Este exame é realizado em secreção (swab) de nasofaringe.
• É possível fazer o teste também em secreção traqueal, lavado brônquico ou broncoalveolar. Essas duas últimas coletas devem ser executadas pelo médico assistente ou previamente agendadas para coleta por um médico broncoscopista do Fleury.
• O jejum de duas horas é necessário para evitar a ocorrência de vômito durante a coleta da amostra.
• A coleta é realizada nas Unidades Campinas, Rochaverá, República do Líbano I, Paraíso, Villa-Lobos e nas Unidades Hospitalares.

Processamento e adequação da amostra

Material

• Secreção (swab) de nasofaringe - receber dois FLOQSwabs em frasco de cultura de urina (tampa vermelha).
• Secreção traqueal, lavado brônquico ou lavado broncoalveolar - receber frasco estéril com um mínimo de 0,5 mL.

Estabilidade das amostras:

-- em temperatura ambiente: não aceitável;

-- sob refrigeração (2-8°C): 72 horas;

-- congelado: não aceitável.

Método

• PCR em tempo real.

Valor de referência

• Negativa.

Interpretação e comentários

• A incidência de coqueluche tem aumentado nos últimos anos, particularmente nos países que utilizam a vacina acelular, que parece conferir imunidade menos duradoura para esta doença.
• Os testes mais utilizados para o diagnóstico da doença são a cultura em meio específico e a PCR, ambas realizadas com amostra coletada da nasofaringe, sítio preferencial de colonização pelo patógeno no trato respiratório superior. A sorologia é útil para diagnosticar surtos e para esclarecer casos de negatividade da PCR e persistência do quadro clínico.
• A cultura em meio específico permite o diagnóstico até a segunda semana após o início dos sintomas e tem sensibilidade de 12% a 60%, mas sua especificidade é de 100%.
• A PCR em tempo real é o teste mais sensível. Permite o diagnóstico até a terceira semana após o início dos sintomas, tem sensibilidade de 70% a 99% e especificidade de 86% a 99%.

Em caso de negatividade da PCR, e persistência de sintomas por mais de três semanas, a sorologia com antígeno PT100 e a sorologia pareada, com intervalo de 14 dias entre as coletas, pode confirmar o diagnóstico de coqueluche.

• A PCR apresenta resultados positivos mesmo após o início da terapia antimicrobiana. Um estudo em crianças com coqueluche evidenciou que após cinco dias de tratamento a PCR manteve-se positiva em todos os pacientes. Após 14 e 21 dias de tratamento, a PCR manteve-se positiva, respectivamente, em 83% e 66% dos pacientes analisados. Para informações adicionais consultar Bidet et al. Real-Time PCR Measurement of Persistence of Bordetella pertussis DNA in Nasopharyngeal Secretions during Antibiotic Treatment of Young Children with Pertussis

J Clin Microbiol. 2008 Nov; 46(11): 3636-3638.