BCR-ABL tipo P210, quantificação por tempo real por PCR, Vários Materiais

Orientações aos clientes

I - Informação sobre o exame

• Este exame investiga os rearranjos gênicos e13a2 (b2a2)/e14a2 (b3a2), responsáveis pela produção da proteína p210. O teste não quantifica o rearranjo gênico e1a2, que produz a proteína p190. Portanto, está indicado apenas para os casos de suspeita de doenças mieloproliferativas crônicas, não devendo ser realizado quando se suspeitar de leucemia linfoide aguda (LLA). Para tais casos, recomenda-se o exame PH1PCR.

II - Material

• O teste pode ser feito em amostras de sangue periférico ou de medula óssea, conforme critério médico, colhidas no laboratório ou não.

III - Medula óssea

• Caso seja solicitada a coleta de medula óssea no laboratório, o cliente deve agendá-la previamente.

IV - Material enviado

• A amostra tem de ser mantida sob refrigeração e entregue até 36 horas após a coleta.
• O laboratório não aceita materiais enviados em seringa com agulha.

Processamento e adequação da amostra

• Receber a amostra em embalagem REF e mantê-la nesta condição até a manipulação.
• Não manusear.
• Enviar o material REF o mais rápido possível com a sinalização PH1PCR, QBCRABL1, MUTBCRABL1 e PMLRARA para envio separado a seção, juntamente com o questionário preenchido.
• Rejeitar amostras colhidas em heparina.
• Não aceitar material enviado em seringa com agulha.
• Estabilidade da amostra:

-- temperatura ambiente: não aceitável;

-- refrigerada (2-8ºC): até 36 horas;

-- congelada (-20ºC): não aceitável.

Orientações necessárias

• Este exame se destina ao acompanhamento de indivíduos que tenham leucemia com presença do cromossomo Philadelphia, nos quais exames prévios mostraram a presença do rearranjo gênico [e13a2 (b2a2)/e14a2 (b3a2)],cujo transcrito é responsável pela produção da proteína p210. Este teste é especialmente útil para avaliar a resposta ao uso de imatimibe (Glivec). Na fase de diagnóstico, recomenda-se a realização do exame PH1PCR, que é capaz de detectar os transcritos responsáveis pela codificação das proteínas p210 e p190.

II - Material

• O teste pode ser feito em amostras de sangue periférico ou de medula óssea, conforme critério médico, colhidas no Fleury ou não.

III - Medula óssea

• Caso seja solicitada a coleta de medula óssea no Fleury, o cliente deve agendá-la previamente.

IV - Material enviado

• A amostra tem de ser mantida sob refrigeração e entregue até 36 horas após a coleta.
• Materiais enviados com agulha de punção serão recusados.

Método

• Quantificação do rearranjo gênico BCR/ABL1 [e13a2 (b2a2)/e14a2 (b3a2)] por transcrição reversa e reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) em tempo-real.

Valor de referência

• Indetectável.

Interpretação e comentários

• O estado de remissão morfológica nas doenças onco-hematológicas impõe ao clínico um novo desafio: a detecção de doença residual mínima (DRM) após o tratamento, que constitui uma informação crucial para o planejamento terapêutico subsequente. O rearranjo gênico BCR/ABL1 é característico da leucemia mieloide crônica (LMC) e tem sido utilizado há vários anos como alvo para o acompanhamento da remissão (molecular) dessa doença. Mais recentemente, com a utilização do transplante de medula óssea e a administração do mesilato de imatinibe (Glivec®) para portadores de LMC, aumentou a importância do seguimento molecular dos indivíduos afetados. Além disso, ficou demonstrado que a quantificação do RNA mensageiro do BCR-ABL1 por PCR em tempo real é uma estratégia superior e reprodutível para o acompanhamento desses doentes, já que apresenta melhor sensibilidade e pode ser padronizada em diversos laboratórios.
• O Fleury realiza a investigação de DRM em portadores de LMC por RT-PCR quantitativo em tempo real. Em agosto de 2010, houve alteração na forma de expressão do resultado deste exame. Atualmente, o valor reportado reflete o número de cópias de BCR/ABL1 em relação ao gene controle ABL1 [BCR/ABL1:ABL1], com dado de resposta molecular (RM) convertido na Escala Internacional (IS - International Scale)e não mais em relação ao controle do Fleury. A diminuição da razão [BCR/ABL1:ABL1] ao longo do tratamento (ou seja, redução da RM) indica resposta ao tratamento utilizado.